XÂY DỰNG BỘ KIT MULTIPLEX PCR PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI BA VI KHUẨN Lactobacillus acidophilus, Streptococcus thermophilus VÀ Bacillus subtilis CHO CÁC CHẾ PHẨM PROBIOTICS
DOI:
https://doi.org/10.62985/j.huit_ojs.vol26.no4.673Từ khóa:
Probiotic, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus thermophilus, Bacillus subtilis, bộ kit multiplex PCR.Tóm tắt
Vi sinh vật nhóm probiotic đang được ứng dụng rộng rãi trong ngành công nghiệp y dược và thực phẩm vì những lợi ích sức khỏe của chúng. Nghiên cứu này xây dựng và tối ưu một bộ kit multiplex PCR nhằm phát hiện đồng thời ba chủng lợi khuẩn phổ biến: Lactobacillus acidophilus, Streptococcus thermophilus và Bacillus subtilis. Ba cặp mồi đặc hiệu cho các gen slpA, lacS và sboA được thiết kế và tích hợp vào một phản ứng duy nhất. Bộ kit cho kết quả khuếch đại rõ ràng, không xuất hiện phản ứng chéo hoặc sản phẩm không đặc hiệu. Điều kiện phản ứng tối ưu gồm 75 µM MgCl₂, 300 µM dNTPs và nhiệt độ gắn mồi 61 °C. Khi áp dụng trên 10 chế phẩm probiotic thương mại, giới hạn phát hiện (LOD) của bộ kit multiplex PCR với độ nhạy cao đạt 10/10 mẫu trong các thử nghiệm thực tế. Bộ kit cho thấy độ đặc hiệu, độ nhạy và tính ứng dụng cao. Đây cũng là công cụ hiệu quả cho kiểm định probiotic và xác minh thành phần vi sinh vật trong sản phẩm thương mại.
Tài liệu tham khảo
[1] T. L. A. Bùi et al., “Đánh giá độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của viên nang cứng probiotic EntVN 500 mg trên động vật thực nghiệm,” Tạp chí Khoa học và Công nghệ Nhiệt đới, no. 34, pp. 92–102, 2024, doi: https://doi.org/10.58334/vrtc.jtst.n34.08
[2] C. Hill et al., “The International Scientific Association for Probiotics and Prebiotics consensus statement on the scope and appropriate use of the term ‘probiotic’,” Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology, vol. 11, pp. 506–514, 2014, doi: https://doi.org/10.1038/nrgastro.2014.66
[3] K. Kadri, “Polymerase Chain Reaction (PCR): Principle and Applications,” in Synthetic Biology – New Interdisciplinary Science. IntechOpen, 2019, doi: https://doi.org/10.5772/intechopen.86491
[4] D. E. Kiousi et al., “Development of a multiplex PCR assay for efficient detection of two potential probiotic strains using whole genome-based primers,” Microorganisms, vol. 11, no. 10, Art. no. 2553, 2023, doi: https://doi.org/10.3390/microorganisms11102553
[5] T. L. Nguyễn et al., “Nghiên cứu và ứng dụng kỹ thuật multiplex PCR trong phát hiện vi khuẩn Salmonella sp. và Staphylococcus aureus gây ngộ độc thực phẩm,” Tạp chí Khoa học Công nghệ và Thực phẩm, vol. 18, no. 1, pp. 23–35, 2019.
[6] D. Pinzauti et al., “DNA isolation methods for Nanopore sequencing of the Streptococcus mitis genome,” Microbial Genomics, vol. 8, no. 2, Art. no. 000764, 2022, doi: https://doi.org/10.1099/mgen.0.000764
[7] M. A. de M. Marques et al., “Evaluation of six commercial DNA extraction kits for recovery of Burkholderia pseudomallei DNA,” Journal of Microbiological Methods, vol. 91, no. 3, pp. 487–489, 2012, doi: https://doi.org/10.1016/j.mimet.2012.09.019
[8] K. Wilson, “Preparation of genomic DNA from bacteria,” Current Protocols in Molecular Biology, vol. 56, no. 1, unit 2.4, 2001, doi: http://doi.org/10.1002/0471142727.mb0204s56
[9] Q. K. Hoàng and T. L. T. Phạm, “Phân lập, định danh và xác định các chủng Lactobacillus có tiềm năng probiotic từ con người,” Tạp chí Phát triển Khoa học và Công nghệ, vol. 14, no. K6, pp. 62–76, 2011, doi: https://doi.org/10.15625/0866-7160/V36N1SE.4361
[10] T. B. T. Võ et al., “Thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR để phát hiện và định danh kiểu gen virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi ở Việt Nam,” TNU Journal of Science and Technology, vol. 228, no. 09, pp. 3–10, 2023, doi: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.7456
[11] T. M. T. Trần, “Đặc điểm chủng vi khuẩn lactic dùng trong chế phẩm probiotic phòng và trị bệnh đường ruột cho heo,” Tạp chí Khoa học Trường Đại học Trà Vinh, no. 40, pp. 189–197, 2020, doi: https://doi.org/10.35382/18594816.1.40.2020.631.
[12] I. You and E. B. Kim, “Genome-based species-specific primers for rapid identification of six species of Lactobacillus acidophilus group using multiplex PCR,” PLoS ONE, vol. 15, no. 3, Art. no. e0230550, 2020, doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0230550
